Выполнить согласно заданию.

Во флуоресцентной микроскопии используются два способа освещения препарата: проходящим светом и падающим, светом.
3.3.1. Проточная цитометрия
Проточная цитометрия – метод витального анализа, позволяющий изучать процессы, происходящие в живущей клетке. Для этих целей используются функциональные красители. Как правило, все красители этой группы становятся флуоресцентными только после проникновения в клетку и действия на них внутриклеточных ферментов, либо при возникновении определенных событий (изменение рН, концентрации Ca и др.). Использование функциональных красителей, таких, например, как Calcein AM Propidium Iodide, Fixable Viability Dye eFluor® 450 и др, используется изучения механизма действия различных веществ, а также для оценки функционального состояния клетки в научных исследованиях. [7].
3.4. Проблема соотношения данных, полученных разными методами.
Какой метод надежнее, истиннее?
Только комбинация методов и правильный выбор метода и их сочетания для решения конкретной задачи при работе с конкретным микроорганизмов с учетом его морфологических, физиологических и др. особенностей может позволить объективно оценить жизнеспособность клеток. Но существует ряд общих принципов при формировании стратегии анализа . Определение жизнеспособности может проводиться различными методами. Так, наиболее простыми являются высев на чашки и окраска специальными красителями, которые проникают внутрь клетки только при повреждении её оболочки, более сложные и точные методики оценки жизнеспособности сводятся к определению возможности клеток осуществлять свои функции. Также, методы окраски и флуоресцентной микроскопии являются полуколичественными. Кроме того, часть жизнеспособных бактерий может оставаться неучтенными вследствие наличия сублетальных состояний у бактерий, или когда речь идет о некультивируемых бактериях (при высеве на чашки).
Альтернативами подсчету колоний при высеве на чашки являются методы проточной цитометрии и флуоресцентных окрасок, исследования физиологической реактивности или метаболической активности, и методы, основанные на анализе нуклеиновых кислот.
А кроме того, недостаток вышеперечисленных методов, за исключением проточной цитометрии, в том, что они не позволяют набирать большую статистику за малое время. Этого недостатка лишена методика проточной цитометрии.
Проточная цитометрия является современной технологией быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов. Преимущество проточной цитометрии в том, что данный метод позволяет за малое время для целой популяции клеток идентифицировать апоптозные и некрозные клетки (1.2.1.4).
Недостатком метода является измерение интенсивности светорассеяния индивидуальных частиц в фиксированные телесные углы, что дает только 2 независимых параметра для характеризации пробы (например, для апоптозных клеток – размер и наличие выпуклостей клеток). Данного недостатка лишен сканирующий проточный цитометр.


Список литературы
Бондаренко В.М. По поводу нового подхода к классификации фармакопейных лекарственных пробиотических препаратов, биологически активных добавок к пище и продуктов функционального питания // Фарматека. 2007. №2. С. 62.
Зрячкин Н.И. Новый подход к классификации пребиотиков, пробиотиков и синбиотиков; // Фарматека 2007, №2. С. 58.
Демаков В.А., Максимова Ю.Г., Максимов А.Ю. Иммобилизация клеток микроорганизмов: биотехнологические аспекты // Биотехнология. 2008. №2. С. 30.
Корочинский А.В., Верниковский В.В., Степанова Э.Ф. Исследование возможности создания иммобилизованных структур на базе пробиотиков // Успехи современного естествознания. – 2010. – № 5 – С. 34-38
Ушакова Н.А., Некрасов Р.В., Правдин В.Г., Кравцова Л.З. , Бобровская О.И., Павлов Д.С. Новое поколение пробиотических препаратов кормового назначения. Фундаментальные исследования. – 2010. – № 8 – С. 24-28
Ушкалова Е.А. Роль пробиотиков в гастроэнтерологии // Фарматека. – 2007. – № 6. – С. 16–23.
Breeuwer P., Abee T.. Assessment of viability of microorganisms employing fluorescence techniques // International Journal of Food Microbiology. - 55 (2000) 193–200
Cook M.T., Tzortzis G. et al. Microencapsulation of probiotics for gastrointestinal delivery // Journal of Controlled Release. - 162 (2012) 56–67
Keer J.T., Birch L. Molecular methods for the assessment of bacterial viability. // Journal of Microbiological Methods. - 53 (2003) 175– 183
Roberfroid M.B. Prebiotics: preferential substrates for specific germs? // Am.J.Clin.Nutr. – 2001. – 73(suppl). – P. 406–409.
Simon O., Jadamus A., Vahjen W. Probiotic feed additives – effectiveness and expected modes of action // Journal of Animal and Feed Sciences. – 2001. – Vol. 10. – P. 51–67.
Walker R., Buckley M. Probiotic microbes: the scientific basis // A report from the American Academy of Microbiology. – 2006. – 22 р. Сайт Антибиотики и антимикробная терапия http://www.antibiotic.ru.










2