Особенности культурального метода исследования микробиологии

Протеолитические свойства на желатине и лакмусовом молоке.Пептолитические свойства.Например, уже представленная ранее Escherichiacoli на мясо-пептидном бульоне дает интенсивное помутнение, образует легко разбивающийся осадок. На мясо-пептидном агаре выявляются сочные, круглые, с ровными краями, серо-белого цвета колонии, на мясо-пептидном агаре с кровью – сочные, круглые, с ровными краями колонии, на среде Эндо – ярко-красные колонии (рис. 1), на среде Левина – темно-фиолетовые или черные колонии.Рисунок 1 – Колония Escherichiacoliна среде ЭндоКлетки Escherichiacoli обладает высокой сахаролитической активностью, для выявления чего проводят посевы на «цветной ряд» (среды Гиса). Кроме того наблюдается ферментированные глюкозу, лактозу, маннит с образованием кислоты и газа. Сахароза не расщепляется. Также бактерия не разжижает желатин, не образует сероводород, образует индол, дает положительную реакцию с метиленовым красным (ярко-розового цвета), отрицательную реакция Фогес-Проскауэра.В числе методов, которые применяются для выявления резистентности микроорганизмов к антимикробным препаратам выделяются:Метод серийных разведений антимикробных препаратов в питательной среде (рис. 2):Метод серийных разведений антибиотиков в жидких средах.Метод серийных разведений антибиотиков в плотных питательных средах.Макрометод в пробирках.Микрометод в планшетах.Рисунок 2 – Метод серийных разведенийМетод позволяет выявить минимальную ингибирующую концентрацию и максимальную бактерицидную концентрацию препарата. Метод пороговых концентраций позволяет определить чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам путем использования двух пороговых концентраций препарата.Диффузный метод – диско-диффузионный метод (рис. 3), Е-тест. Принцип диско-диффузного метода состоит в пропитывании антимикробным препаратом бумаги. Данная бумага помещается в колонии бактерий и отмечается (или не отмечается) затруднение их роста. При Е-методе вместо бумажного диска применяется полимерная полоска 5х50 мм, откалиброванная по гридиенту концентрации антибиотика. Рисунок 3 – Выявление антибиотикорезистентности диско-диффузным методом Пример длительности исследования по дням представлен в Приложении 2.Таким образом, можно говорить о большом разнообразии методов и подходов, которые применяются в культуральном методе исследования в микробиологии.ЗАКЛЮЧЕНИЕИзучив основные особенности культурального метода в современной микробиологии, можно обобщить полученные данные и сделать ряд выводов. Так, культуральный метод наряду с микроскопией и серологическими исследования занимает важнейшее место в современной микробиологии. Это связано с тем, что культуральный метод имеет высокую точность, может применяться практически для любого микроорганизма.Особенности культурального метода микробиологических исследований состоят в использовании питательных сред, на которые происходит посев материала с последующей фиксацией процессов роста и развития колоний. Также в процессе исследования определяется антибиотикорезистентность, особенности физиологии конкретной колонии бактерий.Применение культурального метода микробиологических исследований из-за его универсальности очень широко. С его помощью идентифицируется большое число микроорганизмов, например Escherichiacoli.Таким образом, цель и задачи работы выполнены. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВВоробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиология: Учебное пособие для студ. высш мед.учеб. заведений/ А.А Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков. – 4-е изд., стер. – М.: Издательский центр «Академия», 2010. – 464 с.Инфекционные болезни: национальное руководство/ Под ред. Н.Д. Ющука. Ю.Я. Венгерова. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2018. – 1104 с.Камышева К.С. Микробиология, основы эпидемиологи и методы микробиологических исследований: учеб.пособие./ К.С. Камышева. – Ростов н/Дону: Феникс, 2010. – 346 с.Клиническая лабораторная диагностика: Национальное руководство: в 2 томах/ под ред. В.В. Долгова, В.В, Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 808 с.Левинсон У. Медицинская микробиология и иммунология/ У. Левинсон; пер. с анг. под ред. д-ра мед.наук. Проф. В.Б. Белобородова. – М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2015. – 1181 с.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 1: учеб.по дисциплине «Микробиология, вирусология и иммунология» для студентов учреждений высш. образования, обучающихся по специальности 060101.65 «Лечебное дело», 060103.65 «Педиатрия», 060104.65 «Медико-профилакт. Дело»/ Под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 448 с.Россия в цифрах. 2018: Крат.стат. сб./ Росстат. – М.: 2018. – 522 с.СбойчаковВ.Б. Микробиология, основы эпидемиологии и методы микробиологических исследований: учебник для средних медицинских учебных заведений/ В.Б. Сбойчак. – 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: СпецЛит, 2017. – 712 с.Руководство по медицинской микробиологии. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. Книга II/ Колл. авторов// Под ред. А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой, С.М. Ивановой. – М.: Издательство БИНОМ, 2010. – 1152 с. Заболеваемость населения социально-значимыми болезнями/ Росстат [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.gks.ru/free_doc/new_site/population/zdrav/zdr2-2.xls.МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериала в микробиологические лаборатории» [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://docs.cntd.ru/document/1200044664.ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Алгоритм приготовления питательных средПроявление питательных сред происходит по следующему алгоритму:Расчет навески.Варка среды.Установление оптимальной кислотности.Фильтрация среды.Осветление среды.Разлив среды в лабораторную посуду.Стерилизация среды.Контроль качества приготовления среды.Данный алгоритм можно продемонстрировать на такой сред как мясопептонный бульон (МПБ).В состав МПБ входят мясная вода, пептон и поваренная соль. Для приготовления мясной воды используют свежее мясо крупного рогатого скота или лошадей. Мясо освобождают от костей, жира и сухожилий и пропускают через мясорубку. На 1 массовую долю фарша необходимо 2 массовые доли воды.Полученный фарш заливают водой. Ставят на 18-20 ч в прохладное место (4-6° С), затем кипятят в течение часа.При варке мясной воды на поверхности жидкости появляется некоторое количество жира, который необходимо снять.Полученную массу фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Фарш отжимают, к фильтрату добавляют воды до первоначального объема.Для приготовления МПБ к мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% химически чистой поваренной соли, кипятят 10 мин, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,2-7,4 прибавлением щелочи или двууглекислой соды и снова кипятят 10 мин. Профильтрованный бульон должен быть цвета соломы и совершенно прозрачным.Бульон разливают по пробиркам и колбам, закрывают ватными пробками.Колбы и пробки обвязывают пергаментной бумагой и стерилизуют 20-30 мин при избыточном давлении 0,1 МПа.ПРИЛОЖЕНИЕ 2. Ход культурального исследования по днямКультуральное исследование может длится разное количество дней, поскольку разные культуры растут с разной скоростью. Пример хода исследования для стафилококка:Подготовка к исследования.1 день – посев материала на желточно-солевой агар. Посев крови в сахарный бульон.2 день – пересев для идентификации возбудителя.3 день – изучение культуральных свойств возбудителя, микроскопия мазка, определение чувствительности к антибиотикам.4 день – выдача готового результата.