Иммуноферментный анализ, принцип метода, возможности использования.

На сегодняшний день выделены группы антигенов ВЭБ, выявление антител к которым позволяет не только определить наличие инфекции, но и дифференцировать стадии заболевания, прогнозировать его развитие и контролировать эффективность лечебных мероприятий. Наибольшее значение для серодиагностики ВЭБ-инфекции имеет определение антител к капсидным антигенам (ВКА). Антитела к вирусному капсидному антигену (анти-VCA) делятся на классы IgM и IgG. Анти-VCA IgM выявляется на ранней стадии инфекции и выявляется в течение 4-6 недель. Анти-VCA IgG выявляется в острой фазе инфекции, и их уровень снижается до необнаруживаемого в течение 3-6 месяцев. Антитела к раннему антигену (анти-ЭА) отмечают активную инфекцию, но 20% здоровых людей могут присутствовать в течение многих лет. Наличие антител к раннему антигену может также указывать на реактивацию существующей инфекции через несколько лет после первоначального заражения. Антитела к ядерному антигену ЭБНА не указывают на острую фазу, но медленно нарастают в течение 2-4 месяцев от начала заболевания и сохраняются на всю жизнь.Наибольшее значение для серодиагностики ВЭБ-инфекции имеет определение антител к капсидным антигенам (ВКА). Антитела к вирусному капсидному антигену (анти-VCA) делятся на классы IgM и IgG. Анти-VCA IgM выявляется на ранней стадии инфекции и выявляется в течение 4-6 недель. Анти-VCA IgG выявляется в острой фазе инфекции, и их уровень снижается до необнаруживаемого в течение 3-6 месяцев. Антитела к раннему антигену (анти-ЭА) отмечают активную инфекцию, но 20% здоровых людей могут присутствовать в течение многих лет. Наличие антител к раннему антигену может также указывать на реактивацию существующей инфекции через несколько лет после первоначального заражения. Антитела к ядерному антигену ЭБНА не указывают на острую фазу, но медленно нарастают в течение 2-4 месяцев от начала заболевания и сохраняются на всю жизнь.Применение ИФА в диагностике онкозаболеванийИммуноферментный анализ также незаменим для иммунодиагностики рака с использованием онкомаркеров. Опухолевые маркеры-это вещества, образующиеся опухолевыми клетками и секретируемые в биологические жидкости, в которых они могут быть количественно определены неинвазивными методами. Измерение уровня онкомаркеров широко применяется в диагностике, лечении, мониторинге онкологических больных и доклиническом выявлении рецидивов. Онкомаркеры включают в себя большую группу факторов, концентрация которых в биологических жидкостях зависит от развития злокачественного процесса. От соединений, продуцируемых нормальными клетками, опухолевые маркеры отличаются либо качественно (опухольспецифичны), либо количественно (ассоциированы с опухолью, но присутствуют в низких концентрациях в нормальных клетках). Некоторые из опухолевых маркеров секретируются в кровь, поэтому их концентрацию можно определить с помощью иммуноферментного анализа. Существует целый ряд веществ, которые можно рассматривать как онкомаркеры при различных локализациях злокачественного процесса. К ним относятся опухолеассоциированные антигены или антитела, гормоны, ферменты, продукты метаболизма и цитокины. В клинической практике используется около двух десятков веществ, имеющих достаточное диагностическое значение и рекомендованных к применению в качестве онкомаркеров.ИФА часто используется для определения простат-специфического антигена (пса). Пса является наиболее эффективным онкомаркером при раке предстательной железы. По своей химической природе это гликопротеин, секретируемый эпителиальными клетками канальцев предстательной железы. Он принадлежит к семейству калликреиновыхсериновых протеаз и является химотрипсиноподобнойгликопротеазой. Синтез этого белка контролируется андрогенами через рецепторы эпителиальных клеток протоков предстательной железы. Синтезированный пса поступает непосредственно в кровоток, где находится в свободном и связанном состоянии. Злокачественные новообразования, воспалительные процессы, гипертрофия и гиперплазия предстательной железы сопровождаются значительным повышением уровня ПСА в сыворотке крови. Исследование ПСА используется для диагностики, мониторинга лечения рака предстательной железы и дифференциальной диагностики рака и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.Показаниями к проведению исследования пса являются •диагностика рака предстательной железы.Скрининг мужчин старше 40 лет на рак предстательной железы в рамках обязательного медицинского обследования населения.Дифференциальная диагностика рака предстательной железы и доброкачественной гиперплазии предстательной железы у лиц с уровнем ПСА от 4 нг / мл до 30 нг / мл.Для дифференциации пса от ДГПЖ определяют отношение свободного ПСА к общему ПСА — Psacob./Psaob. x 100%. При интерпретации результатов исследования следует помнить, что содержание пса в норме увеличивается с возрастом. Повышение уровня наблюдается также после таких процедур, как пальцевое ректальное исследование, цистоскопия, колоноскопия, тепловые процедуры, трансуретральная биопсия, лазерная терапия, гормональная и противовоспалительная терапия, а также после употребления острой пищи и алкоголя. Забор крови для исследования в этих случаях следует проводить не ранее чем через 5-6 дней и не ранее чем через несколько недель после лечения простатита или инфекции мочеполовых путей.После радикальной простатэктомии уровень ПСА снижается до неопределяемого значения. Подтвержденное обнаружение пса после операции свидетельствует либо о неполной резекции, либо о наличии метастазов. Повышение уровня ПСА является маркером рецидива, как правило, значительно опережающим другие признаки его развития.ЗаключениеТаким образом, ИФА является одним из наиболее чувствительных, специфичных, воспроизводимых, клинически информативных, универсальных и общедоступных методов лабораторного исследования. ИФА заменил ранее широко применявшиеся методы агглютинации, преципитации и РИА в клинической практике. По сравнению с вышеупомянутыми методами ИФА менее трудоемка и менее трудоемка, а также удобна для выполнения большого количества аналогичных анализов. ИФА сочетает в себе уникальную специфичность иммунохимического анализа с высокой чувствительностью для определения ферментной метки. Чувствительность метода определяется следующими факторами: аффинностью антител, предпочтительно с использованием моноклональных антител; специфической активностью фермента; интенсивностью сигнала; чувствительностью учета сигнала. Отдельные варианты твердофазного ИФА позволяют обнаруживать в образце единичные молекулы. Правильное применение этого метода позволяет значительно расширить диагностические возможности медицинских лабораторий.ЛитератураКишкун А.А. Иммунологические исследования и методы диагностики инфекционных заболеваний в клинической практике. . М.: Медицинское информационное агентство, 2009.л.м. анцилевиЧ, л.а. ягудина Практическое применение иммуноферментного анализа в диагностике заболеваний // Практическая медицина. 2014. №3 (79).Самойленков П.В. Принципы иммуноферментного анализа, основные виды ИФА, применение в диагностике. — Москва, 2009, РГМУStephanie D Gan, Kruti R Patel Enzyme immunoassay and enzyme-linked immunosorbent assay // Invest Dermatol .2013. №133(9):e12.Taylor P.N., Razvi S. et al. Clinical review: A review of the clinical consequences of variation in thyroid function within the reference range. — J. Clinic. Endocrinol. Metab. — 2013 sep. — Vol. 98 (9). — P. 3562-71.