Принципы работы с культурами эукариотических клеток

Еще одним мощным методом, который употребим только к клеткам in vitro и ex vivo (сразу после выделения), является проточная цитометрия — поштучное изучение клеток в потоке жидкости: клетки по одной проходят через луч лазера, а специальные детекторы ловят сигнал светорассеяния и флуоресценции от освещенной лазером клетки. В различие от микроскопии, она представляет собой исходно количественный метод, то есть разрешает интенсивность флуоресценции измерить точно и обладает высокой производительностью: скорость обработки в минуту достигает миллиона клеток. Данное разрешает проводить «перепись» гетерогенных клеточных популяций, какими являются все первичные клеточные культуры. В частности, при идентификации ей нет альтернатив, сортировке и подсчете редких в популяции клеток, таких как антиген-специфичные лимфоциты или стволовые клетки, которых может быть лишь несколько клеток на миллион. Цитометрия нашла наибольшее распространение в иммунологии для анализа субпопуляций лейкоцитов без перевода их в культуру. Существенной разновидностью цитометрии является клеточная сортировка в потоке, которая разрешает не только анализировать, но и с чистотой более 99%. выделять отдельные субпопуляции из гетерогенных клеточных смесей [10]

Заключение


Клетки в культуре подвержены высокой наследственной изменчивости при длительном культивировании под действием меняющихся условий внешней среды. В большинстве случаев невозможно определить, изменение каких конкретных свойств имело место. Потому при работе с клеточными культурами должны быть приняты меры, которые позволяют избегать усиления генетической нестабильности.
Удачное сохранение направленно измененных или исходных свойств клеточных линий, а также получение воспроизводимых экспериментальных результатов достигается с помощью соблюдения строго выдерживаемых условий криоконсервации и культивирования клеточных культур.
Метод культур клеток претерпел существенные изменения и в настоящее время обширно распространен. Обширное распространение метода привело к росту числа линий клеток, внешне трудно отличимых. Опыт работы с культурами клеток в различных лабораториях мира показал высокую вероятность контаминации клеток не только посторонними микроорганизмами, но и контаминации клеток клетками иных линий.
Данная проблема актуальна при наличии нескольких линий клеток в лаборатории, особенно занимающейся получением собственных культур. Применение культур клеток с отсутствием идентификационных характеристик под сомнение ставит адекватность получаемых научных результатов. Исследование клеток в соответствии с современными требованиями разрешает идентифицировать клетки и гарантировать их качество. Одними из основных направлений практического использования метода являются производство вакцинных, лекарственных и диагностических препаратов, а в последние годы особенно активно культуры клеток анализируются, как продукт для клеточной или регенеративной терапии. Основой приобретения безопасного продукта должна быть безопасная и стабильная по характеристикам культура клеток.
Система создания двухъярусного банка клеток, при котором создаются посевной и рабочий банки клеток, является наиболее практичным подходом для обеспечения стабильного и продолжительного производства. Аттестация банков клеток в соответствии с современными требованиями, уделяя главное внимание контролю биологической безопасности клеток и сохранению свойств клеток при длительном культивировании, обеспечит безопасность и стабильность производства и получаемого продукта. Бурно развивающееся в последние годы направление по использованию клеток в регенеративной медицине может стать альтернативным методом спасения больных с острой недостаточностью органов. Удачное использование метода показано как в моделях на животных, так и в медицинской практике.

Литература

Биотехнология биологически активных веществ / под ред. И.M. Грачевой, Л.A. Ивановой. – M.: Элевар, 2006. – 453 с.
Биотехнология растений: культура клеток / под ред. P.Г. Бутенко. – M. : Агропромиздат, 2019. – 280 с.
Биотехнология : учебник и практикум для вузов / под редакцией H.B. Загоскиной, Л. B. Назаренко. — 3-е изд., испр. и доп. — M.: Юрайт, 2021. — 381 с.
Бутенко, P.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе / Р.Г. Бутенко. – M. : ФБК–ПРЕСС, 2018. – 160 с.
Валиханова, Г.Ж. Биотехнология растений / Г.Ж. Валиханова. – Алматы : «Конжык», 2017. – 272 с.
Войнов H.A. Современные проблемы и методы биотехнологии: / H.A. Войнов [и др.]; под науч. ред. Т.Г. Воловой. – K.: ИПК СФУ, 2019. – 418 с.
Дитченко, T.И. Культура клеток, тканей и органов растений: курс лекций / T.И. Дитченко. – Мн.: БГУ, 2017. – 107 с.
Егорова, T.A. Основы биотехнологии: учеб. пособие / Т.А. Егорова, C.M. Клунова, E.A. Живухина. – M. : Академия, 2019. – 208 с.
Ефимова Н.В. Введение в прикладную биотехнологию / Н.В. Ефимова. – Петропавловск-Камчатский: КамчатГТУ, 2019. – 95 с.
Животная клетка в культуре. Методы и применение в биотехнологии / под ред. Л.П. Дьяконова, B.И. Ситькова. – M.: Компания Спутник, 2018. – 400 с.
Культура животных клеток. Методы / под ред. Ф. Фрешни. – M.: Мир, 2018. – 333 с.
Основы биотехнологии : учебник и практикум для среднего профессионального образования / под редакцией H.B. Загоскиной, Л.B. Назаренко. — 3-е изд., испр. и доп. — M.: Юрайт, 2021. — 381 с.
Першина Л.А. Культивирование изолированных клеток и тканей высших растений: учеб. пособие. Ч. 1. / Л.А. Першина. – Новосибирск : НГУ, 2020. – 46 с.
Процессы и аппараты биотехнологии: ферментационные аппараты : учебное пособие для среднего профессионального образования / А. Ю. Винаров [и др.] ; под редакцией В. А. Быкова. — 2-е изд., перераб. и доп. — M.: Юрайт, 2021. — 274 с.
Сельскохозяйственная биотехнология: учебник / В.С. Шевелуха, Е.А. Калашникова, Е.С. Воронин [и др.]. – M.: Высш. шк., 2019. – 469 с.
Цыренов, В.Ж. Основы биотехнологии: культивирование клеток человека и животных. Учебно-методическое пособие / B.Ж. Цыренов. – Улан-Удэ: ВСГТУ, 2018. – 48 с.
Чечина, O.H. Общая биотехнология : учебное пособие для вузов / O.H. Чечина. — 3-е изд., перераб. и доп. — M.: Юрайт, 2021. — 266 с.










16